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乳糖和蔗糖的液相色譜檢測(cè)

 更新時(shí)間:2017-04-21 點(diǎn)擊量:3254

乳糖和蔗糖的檢測(cè)

摘要:本實(shí)驗(yàn)根據(jù)中國(guó)藥典2010版二部乳糖項(xiàng)下測(cè)試方法,采用液相色譜 (HPLC) 法結(jié)合示差折光檢測(cè)器分離乳糖與蔗糖,并選擇了4種不同類(lèi)型的氨基柱對(duì)乳糖和蔗糖的保留及分離情況進(jìn)行了考察。結(jié)果表明:流動(dòng)相為乙腈:=75:25(v/v),使用Innoval NH2色譜柱(5 μm100Å,4.6×250 mm) 對(duì)兩種物質(zhì)的分離度為2.44,實(shí)現(xiàn)了乳糖和蔗糖的良好分離,且各物質(zhì)峰形良好,保留時(shí)間穩(wěn)定,能夠滿(mǎn)足藥典要求。

關(guān)鍵詞:液相色譜法;示差檢測(cè)器;乳糖;蔗糖;氨基柱;

前言

乳糖是一種雙糖,由一分子β-D-半乳糖和一分子α-D-葡萄糖在β-1,4-位形成糖苷鍵相連,有兩種端基異構(gòu)體:α-乳糖和β-乳糖,在水溶液中可互相轉(zhuǎn)化。α-乳糖很容易結(jié)合一分子結(jié)晶水。乳糖甜度約是蔗糖的六分之一。蔗糖容易被酸水解,水解后產(chǎn)生等量的D-葡萄糖D-果糖,其不具有還原性。發(fā)酵形成的焦糖可以用作醬油的增色劑。乳糖作為一種藥用輔料,以填充劑或稀釋劑的形式廣泛應(yīng)用于片劑、膠囊、顆粒劑和凍干產(chǎn)品中。然而,一般藥用乳糖來(lái)源于牛奶,可能存在可引起過(guò)敏反應(yīng)的雜蛋白。因此,2010版藥典增加了乳糖的檢查項(xiàng)內(nèi)容。本實(shí)驗(yàn)以藥典為依據(jù),實(shí)現(xiàn)了乳糖與蔗糖的良好分離。

實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備

液相色譜儀,示差檢測(cè)器

1.1.2 試劑材料

超純水;乙腈色譜純;蔗糖和乳糖客戶(hù)提供,分別加水溶解并稀釋成濃度為10 mg/mL的儲(chǔ)備溶液

色譜柱1-6:規(guī)格均為μm100Å,4.6×250 mm

1.1.3 色譜條件

流動(dòng)相:A-水,B-乙腈,A:B=75:25 (v/v);

流速:1.0 mL/min;

柱溫:室溫

進(jìn)樣量:10 uL;

2 結(jié)果與討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了六種色譜柱對(duì)乳糖及蔗糖的分離效果,由表1及圖1-5可知,依據(jù)2010版藥典,流動(dòng)相為乙腈:=75:25(v/v),柱溫為室溫時(shí),采用Innoval NH2色譜柱分離效果,分離度為2.44。

1. 不同氨基柱及HILIC色譜柱乳糖與蔗糖分離測(cè)試數(shù)據(jù)對(duì)比(乙腈:水=7525

色譜柱

柱溫

組分名稱(chēng)

保留時(shí)間/min

拖尾因子

分離度

色譜圖

氨基柱A

室溫

乳糖

6.485

1.08

1

蔗糖

7.135

1.00

1.18

Innoval NH2

室溫

乳糖

7.180

1.16

2

蔗糖

8.707

1.22

2.44

氨基柱B

室溫

乳糖

8.750

1.05

3

蔗糖

10.170

1.00

2.03

氨基柱C

室溫

乳糖

6.383

1.15

4

蔗糖

6.983

1.09

1.15

     

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