HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。
液相色譜在使用過程中的四大關(guān)鍵因素
01、液相色譜儀本身：
對于儀器本身一般不會有問題，特別是剛買回來的新儀器。對于儀器本身最重要的就是儀器的校驗(yàn)，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作(包括IQ、PQ、OQ)，確認(rèn)順利通過后，再請國家或省級儀器檢定局的來校驗(yàn)，檢定合格后就可以放心用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會對儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗(yàn)，目的就是為了保證儀器的正常可運(yùn)行狀態(tài)。
02、色譜條件：
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進(jìn)樣量。流動相就涉及到配制流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因?yàn)榉乐顾驮噭┰囈褐械碾s質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾。
色譜柱會因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測波長也會因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測器氘燈能量的變化，比如基線波動大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時，但實(shí)際上使用時間不止，可根據(jù)實(shí)際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗(yàn)證，會對流速進(jìn)行改變以評價方法的適用性。對于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，進(jìn)樣量這塊現(xiàn)在都使用自動進(jìn)樣，所以進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么
03、操作人員：
首先，作為液相操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)液相的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握最基礎(chǔ)故障的排除和維修。一般液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會出現(xiàn)問題，當(dāng)然這里需要特別指出的是對于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時間。其次，操作人員在配制液相分析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差。
04、液相安裝環(huán)境：
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個是為減少對人體的危害。
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